瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒說明書

本試劑盒采用可以高效、專一結合的DNA硅基質材料和*的緩沖液系統，從TAE或TBE瓊脂糖凝膠上回收DNA段，同時除去蛋白質、其他有機化合物、無機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質。可回收100bp-10kb大小的片段，回收率大于80%（小于100bp和大于100kb的DNA段回收率為30-50%）。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規操作，包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉化等試驗。
注意事項：在使用本試劑盒前請閱讀此注意事項。
1. 電泳前好更換成新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。
2. 如下一步實驗要求較高，則應盡量使用TAE電泳緩沖液。
3. 切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對DNA造成損傷。
4. 回收小于100bp和大于100kb的DNA段時，應加大溶膠液的體積，延長吸附和洗脫的時間。
5. 回收率與初始DNA量和洗脫體積有關，初始量越少、洗脫體積越小，回收率越低。
6. 如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
操作步驟: （使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。）
1、瓊脂糖凝膠電泳后，將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分），放入干凈的離心管中，稱取重量。
2、向膠塊中加入3倍體積溶膠液（如果凝膠重為0.1g，其體積可視為100ul,則加入300ul溶膠液），50-55℃水浴放置10min，期間不斷溫和地上下翻轉離心管，以確保膠塊充分溶解。
注意：溶膠時，如果溶膠液變為紅色（正常情況下為淡黃色），可向含有DNA的膠溶液中加入10-30ul 3M醋酸鈉（pH5.2）將膠溶液調為淡黃色，否則將會影響DNA與吸附柱的結合，影響回收效率。
3、將上一步所得溶液加入一個吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入收集管中。
注意：膠塊*溶解后好將膠溶液溫度降室溫再上柱，因為吸附柱在較高溫度時結合DNA的能力較弱。
4、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸
附柱放入收集管中。
5、向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
6、12000rpm離心2min，盡量除去漂洗液。將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，防止漂洗液中的乙醇影響后續的實驗。
7、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜*懸空滴加適量經65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置2min，12000rpm離心1min。
注意：1)、為了增加回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，12000rpm再次離心1min。
2)、洗脫緩沖液體積不應少于30ul，體積過小影響回收效率。
3)、洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5之間。
8、DNA產物-20℃保存。
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