線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ活性測定試劑盒

產品內容：

提取液：80mL×2 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存；溶于 1mL 丙酮，可分裝后-20℃保存。臨用前再用丙酮 100 倍 稀釋后使用。 試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；臨用前加入 2mL 丙酮溶解備用。 試劑四：液體 2.5mL×1 瓶，4℃保存；

產品說明： 線粒體復合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶 Q 還原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線 粒體中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同時輔基 FAD 還原為 FADH2，后者進一步還原氧化型輔 酶 Q 生成還原型輔酶 Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。 復合體Ⅱ的催化產物還原型輔酶 Q 可進一步還原 2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在 605nm 有 特征吸收峰，通過檢測 2,6-二氯吲哚酚的少速率來計算該酶活性。

試驗中所需的儀器和試劑： 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微玻璃比色皿/96 孔板、丙 酮、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、復合體Ⅱ的提取：

(1) 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1.0 mL 提取液，用勻漿器或研缽于冰上勻漿。

(2) 4 ℃ 600 g 離心 10min。

(3) 將上清液移另一離心管中，4 ℃ 11000 g 離心 15min。

(4) 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅱ（此步可選做，可以判斷線粒體提 取效果）。

(5) 在沉淀中加入 400uL 提取液，超聲波破碎（功率 20％，超聲 5 秒，間隔 10 秒，重復 15 次）， 用于復合體Ⅱ酶活性測定，并且用于蛋白含測定。

相關文獻：

《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638

線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ活性測定試劑盒