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    產(chǎn)品名稱:人外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒

    產(chǎn)品型號(hào):P9040

    產(chǎn)品報(bào)價(jià):

    產(chǎn)品特點(diǎn):人外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
    貨號(hào):P9040
    規(guī)格:2×200ml/KIT
    保存:室溫避光儲(chǔ)存,有效期少 2 年。

    免費(fèi)咨詢:010-50973130

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    P9040人外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒的詳細(xì)資料:

    人外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒   
    貨號(hào):P9040
    規(guī)格:2×200ml/KIT
    保存:室溫避光儲(chǔ)存,有效期少 2 年。

     

    產(chǎn)品組成:
                       名稱              規(guī)格
                       試劑 A            200ml
                       紅細(xì)胞裂解液      100ml
                       全血及組織稀釋液  200ml
                       細(xì)胞洗滌液        200ml

     

    注意事項(xiàng):
         A.本實(shí)驗(yàn)要求,在正常大氣壓下,分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時(shí)呈較高密度,在高溫時(shí)呈較低密度。細(xì)胞分離液從冰箱取出后,不可立即使用,操作前可將樣本和分離液復(fù)溫18-22℃。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,好在取血后2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),血液提取后存放時(shí)間越長(zhǎng)細(xì)胞活性越低。
        B.實(shí)驗(yàn)過程中,如需稀釋血液或洗滌細(xì)胞,不可使用含Ca 2+ 、Mg 2+ 離子的緩沖液及培養(yǎng)液,其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集,大大降低細(xì)胞得率及純度。
        C.優(yōu)抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。注意在血液稀釋過程中去除抗凝劑體積。
        D.好使用無靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。
        E.由于各品牌離心機(jī)的性能不同,國(guó)內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間,摸索的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定)。

     

    分離方法 :
        1. 取1ml新鮮抗凝血,與全血及組織稀釋液1:1 混勻后小心加于1份A液之液面上;
        2. 以500g(約1800轉(zhuǎn)/分)離心25分鐘(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子)。
        3. 此時(shí)離心管中由上下細(xì)胞分四層。*層:為血漿層。第二層:為環(huán)狀乳白色的單個(gè)核細(xì)胞層。
        第三層:為略帶混濁的分離液層(富集一定量的中性粒細(xì)胞)。第四層:為紅細(xì)胞層。棄去*層血漿層及第二層細(xì)胞,收集第三層分離液層和第四層紅細(xì)胞層,放入含細(xì)胞洗滌液10ml的試管中,充分混勻后,以500g約(1800轉(zhuǎn)/分)離心30分鐘。沉淀經(jīng)1次洗滌后用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞,再經(jīng)3次洗滌去除紅細(xì)胞內(nèi)溶物和碎片后取沉淀細(xì)胞即為所需中性粒細(xì)胞。
        注:A. 提取率約為80%。
        B. 紅細(xì)胞裂解過程詳見“紅細(xì)胞裂解液使用說明”。


    紅細(xì)胞裂解液使用說明 :
        本公司紅細(xì)胞裂解液在裂解紅細(xì)胞的同時(shí)不損傷并在一定程度上保護(hù)淋巴細(xì)胞(lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞,所獲得的細(xì)胞可保持完好的生物活性和完整的細(xì)胞形態(tài)。另外,本裂解液中無DNA及RNA酶,配合細(xì)胞分離液使用所提細(xì)胞可廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
        紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer),也稱ACK Lysis Buffer,是一種用于從人或鼠等的血液或組織細(xì)胞樣品中裂解并去除無細(xì)胞核紅細(xì)胞的溶液。
        本裂解液不適用于有細(xì)胞核紅細(xì)胞的裂解,例如鳥或禽類的紅細(xì)胞。本裂解液經(jīng)過無菌處理,處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)。


    使用說明:
        A.  對(duì)于組織細(xì)胞樣品:
        a. 新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理,通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液,離心棄上清。
        b. 加入3-5倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為1ml,則加入3-5ml的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。
        c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
        d. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。
        e. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,重懸沉淀,400-500g離心2-3分鐘,棄上清。可再重復(fù)1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。
        f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
        B.  對(duì)于組織細(xì)胞樣品無需洗滌的快速操作步驟:
        a. 新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理,通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液,離心棄上清。
        b. 對(duì)于0.2ml細(xì)胞沉淀加入1ml紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。
        c. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,混勻。
        d. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
        e. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。
        f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
    注:對(duì)于常規(guī)步驟,多一步洗滌過程中的離心,但可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同時(shí)不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。
        C.  對(duì)于血液樣品:
        a. 取新鮮抗凝血,400-500g離心5分鐘,離心棄上清。
        b. 加入6-10倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為1ml,則加入6-10ml的紅細(xì)胞裂解液。 本步驟在室溫或4度操作均可。 注意: 對(duì)于鼠的血液, 裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠,對(duì)于人的外周血,宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間4-5分鐘,并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
       c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
       d. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。
       e. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,重懸沉淀,400-500g離心2-3分鐘,棄上清。可再重復(fù)1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。
       f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
    注:對(duì)于微量或少量的血液樣品,可以在*步中不進(jìn)行離心棄上清的操作,直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液,并在室溫或4℃裂解4-5分鐘。對(duì)于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對(duì)于人的外周血,宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間10分鐘,但通常不宜超過15分鐘,并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。后續(xù)步驟相同。
       D.  對(duì)于血液樣品無需洗滌的快速操作步驟:
       a. 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解4-5分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。注意:對(duì)于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對(duì)于人的外周血,宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間10分鐘,但通常不宜超過15分鐘,并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
       b. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,混勻。
       c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
       d. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。
       e. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
          注:對(duì)于常規(guī)步驟,多一步洗滌過程的離心,但可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同時(shí)不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。

     

    產(chǎn)品性能指標(biāo) :

    pH 7.0-7.5
    滲透壓 280-340mOsmol/kg
    內(nèi)毒素 ≤0.5EU/ml
    無菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清
    澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10µm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
    含25µm 以上的不溶性微粒5 粒以下


    貯藏及保存期限 :
        本分離液是敏光型的,應(yīng)在18℃-25℃避光保存,有效期兩年。啟封后置4℃保存,有效期一周,若保證無微生物污染,啟封后可置4℃長(zhǎng)期保存。未啟封前保存溫度較低(10℃以下)時(shí)分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

     

    人外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒 

     

     

    參考文獻(xiàn):
    《miR-20a inhibits the killing effect of natural killer cells to cervical cancer cells by downregulating RUNX1》 作者:Suo-Yu Zhu,Qun-Ying Wu,Chen-Xia Zhang,Qiong Wang,Jing Ling,Xian-Ting Huang,Xia Sun,Ming Yuan,Dan Wu,Hua-Fang Yin 期刊:Biochemical and Biophysical Research Communications 影響因子:2.559 PMID:30249397

     

     

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