產品簡介

E010050 Uracil-DNA Glycosylase 尿嘧啶糖基化酶
其作用原理基于：如果在PCR反應中以dUTP替代dTTP摻入DNA中，形成了含dU堿基的PCR擴增產物，該酶能選擇性斷裂單鏈和雙鏈DNA中U堿基的糖苷鍵，降解該PCR擴增產物。

產品介紹：
尿嘧啶DNA糖苷酶（UNG）來源于大腸桿菌重組克隆表達，分子量為25kDa，可催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈DNA釋放游離尿嘧啶。UNG酶對RNA無活性，主要應用于PCR擴增產物的防污染。其作用原理基于：如果在PCR反應中以dUTP替代dTTP摻入DNA中，形成了含dU堿基的PCR擴增產物，該酶能選擇性斷裂單鏈和雙鏈DNA中U堿基的糖苷鍵，降解該PCR擴增產物。

規格：1U/μl

儲存緩沖液：
20mM Tris-HCl(pH8.0，25℃)，150mM NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，0.05% Tween20，50%glycerol.

試劑組成：

10×Reaction Buffer：200mM Tris-HCl(pH8.0，25℃)，100mM NaCl，10mM EDTA，1mg/ml BSA.

活性定義：
37℃條件下，1小時降解1μg含dU堿基的單鏈DNA的酶量為1單位。

保存條件：
每天或每周使用保存于-20℃。長期儲存應保存于-70℃保存，并嚴格避免-70℃保存時反復凍融。

質量控制：

1、SDS-PAGE電泳純度大于98%；

2、1U UNG在 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模版應*降解，不能產生擴增產物。

3、無核酸外切酶和核酸內切酶活性、RNase酶活性；

（1）SDS-PAGE 銀染純度大于98%

（2）UNG 酶消化能力試驗

    以700bp含dUTP的不同拷貝數基因片段為模板，分別加入含0.5U UNG酶的50μl PCR反應體系，50℃ 消化2min，94℃ 滅活4min后進行PCR擴增反應。

A. Biori UNG

B. Promega UNG

Lane 1：Negative control （no template）；

Lane 2：positive control（no UNG）；

Lane 3~lane 10: 103 to 1010 copies of template 

結果表明，我們的UNG酶與Promega UNG酶消化效果相當，均可以有效控制108拷貝以下含有U-DNA的模板的污染。

（3）UNG酶穩定性實驗

將UNG酶置于37℃進行7天加速試驗。以含dUTP的（106、107、108、109 copies/ml）基因為模板，采用含dUTP的體系進行PCR擴增，50μl反應體系加入0.5U UNG酶，于50℃消化2min，94℃滅活4min；然后進行PCR擴增反應。以Promega公司UNG酶為對照，考察UNG酶對模板的消化效果。

1：negative（No template）； 

2～9：postive （104、105、106、107、108、109、1010、1011 copies /ml， No UNG）；

10～14：control Promega UNG（106、107、108、109、1010 copies /ml）；

15～19：Sample UNG（106、107、108、109、1010 copies/ml）。

1～4：Sample UNG（106、107、108、109 copies/ml）；

5～8：Control Promega UNG（106、107、108、109 copies/ml）； 

9：negative （No template）；

10～13：Postive （106、107、108、109 copies/ml，No UNG）。

結果表明，我們的UNG酶與Promega UNG酶穩定性相當，均可以在37℃加速7天，仍保持對107copies/ml含dUTP模板的消除能力。

反應條件：

1、Incubate the product for 2 min at 50℃；

2、Inactivate UNG by heating to 95℃ for 5 min.

注意事項：
1、避免多次凍融，切勿暴露在溫度波動較大之處。溫度波動對產品的穩定性有極大影響。

2、尿嘧啶DNA糖基酶可以在PCR反應前清除不慎污染的U-DNA分子。為有效防止污染，一個實驗室必須在所有的PCR反應中均使用dUTP作為dNTPs組分之一進行擴增，使所有擴增產物都成為U-DNA。

3、由于不同基因堿基組成不同，因此有些基因對UNG酶殘留活性十分敏感，如發現使用UNG 酶影響擴增靈敏度，可以嘗試降低UNG酶的用量或對反應體系中dTTP與dUTP的比例進行調整。推薦使用我公司生產的TS-UNG，該酶滅活更加*，可以大大簡化上述試驗過程。