植物氨態(tài)氮檢測試劑盒

植物氨態(tài)氮檢測試劑盒

植物氨態(tài)氮含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
英文名稱：Plant ammonia nitrogen content detection kit
關(guān)鍵詞：植物氨態(tài)氮|植物氨態(tài)氮檢測|植物氨態(tài)氮測定|氨態(tài)氮
注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
貨號：BC1520
規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存，臨用前將試劑三倒入使其充分溶解備用。該試劑溶解后 10 天內(nèi)有效。
試劑二：粉劑×2 瓶，4℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水充分溶解。
試劑三：液體 45mL×1 瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，10mg 半胱氨酸，4℃避光保存。臨用前加入 1.157mL 提取液，得到 1000μg/mL氮標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：
氮素是構(gòu)成生物體的一種必需元素。銨態(tài)氮進(jìn)入植物細(xì)胞后形成氨基酸或酰胺，植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。
氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物，在 570 nm 有特征吸收峰；通過測定570 nm 吸光度，來計(jì)算氨基酸含量。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、無水乙醇、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提取：
按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，室溫勻漿后于 25℃，12000g 離心 10min，取上清待測。
二、測定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長 570nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將 1000μg/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液用提取液分別稀釋為 200、100、50、25、12.5μg/mL。
3、 操作表：
試劑名稱（μL） 測定管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管
樣本              50     -       -
標(biāo)準(zhǔn)品            -      50      -
蒸餾水            -       -      50
試劑一            500    500    500
無水乙醇          500    500    500
試劑二             50     50     50
混勻后蓋緊瓶蓋封口膜封口（防止水分散失），置于沸水浴中保溫 10 min，冷卻后反復(fù)顛倒 EP管數(shù)次，將測定管 8000rpm 離心 5min 后取上清，于 570nm 測定吸光值。顯色后務(wù)必在 30min 內(nèi)測完。計(jì)算△A=A 測定管-A 空白管，△A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。
三、植物氨態(tài)氮含量計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
以各個氮標(biāo)準(zhǔn)液為橫坐標(biāo)，其對應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b，將△A 帶入方程中，得到 x (µg/mL)
2、NH3-N 含量的計(jì)算
（1）按樣本鮮重計(jì)算
NH3-N 含量（µg /g FW）=x×V 提取÷W= x÷W。
（2）按蛋白濃度計(jì)算
NH3-N 含量（µg/mg prot）=x×V 提取÷（Cpr×V 提取）= x÷Cpr。
W：樣品質(zhì)量，g；
Cpr：蛋白濃度，mg/mL；
V 提取：樣品提取液總體積，1mL。
注意事項(xiàng)：
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取 1-2 個樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果測定的吸光值過高（高于 1），用提取液稀釋后再測定。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《SWATH-MS quantitative proteomic investigation of nitrogen starvation in Arabidopsis reveals new aspects of plant nitrogen stress responses》 作者:Fu-Yuan Zhu,Mo-Xian Chen,Wai-Lung Chan,Feng Yang,Yuan Tian,Tao Song,Li-Juan Xi,Ying Zhou ,ShiXiao,Jianhua Zhang,Clive Lo 期刊:Journal of Proteomics 影響因子:3.537 PMID:30048775