如何選擇合適的重組蛋白

更新時間：2015-01-19

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如何選擇合適的重組蛋白

選擇合適的重組蛋白產品，對你得到正確的實驗結果關重要，可從以下幾點進行選擇：

1、蛋白來源

對于一些蛋白，需要進行一系列的翻譯后修飾才能成為具有活性的成熟蛋白。細菌不能提供這樣的修飾，而哺乳動物細胞可以。因此，選購時應注意蛋白的來源。例如，novaprotein的人IL-4是在E. coli中制備的，金斯瑞的人IL-4是在哺乳動物CHO細胞中制備的。

當然除了上面提到的兩種表達系統外，還有酵母和昆蟲表達系統，四種系統各有優劣，選重組蛋白是一定要注意。

表達	細胞	優點	缺點
原核	E.coli	繁殖快、成本低、產量高；遺傳背景及基因表達調控機制清楚；易于大規模培養，成本低廉	蛋白常為包涵體，純化困難；無糖基化（分泌蛋白，細胞膜上蛋白不可用），生物活性不定；無翻譯后修飾，內毒素含量高
酵母	Pichia	使用簡單，表達量高，His-tag便于純化，一定的翻譯后加工可進行糖基化修飾，操作簡單，適合大規模生產；可誘導表達，也可分泌表達，產物便于純化	有時會出現蛋白切割問題；糖基化不能滿足要求
昆蟲	High-5	產量高，翻譯后加工與哺乳動物相似；對于部分有毒性或較難表達蛋白有優勢；無內毒素污染	蛋白活性不如哺乳動物；適合表達激酶等定位于細胞內的真核蛋白
哺乳	CHO; HEK293	完善的翻譯后加工，活性接近天然蛋白	周期長、技術要求高；表達產量低

2、種屬來源

蛋白的種屬來源常見的有人源、小鼠源和大鼠源等。一般來說，不同種屬之間的蛋白同源性在80%以上就可視為有交叉活性，可推薦使用。

3、生物活性和穩定性

蛋白的純度、內毒素水平和批次間穩定性等直接會影響實驗結果，因此，高品質的蛋白產品會嚴格監控這一環節，并且提供詳細數據。同時，在選擇蛋白產品時還需考慮其生物活性。

一般記得以下五點就行：

· 大多數人類細胞因子對小鼠細胞都有活性。

· 許多小鼠細胞因子對人類細胞也有活性，但比相應人類細胞因子活性低。

· 一些人類的細胞因子（如IL-7）在小鼠細胞中表現出比小鼠細胞因子更高的活性。

· 干擾素、GM-CSF、IL-3 和IL-4 有物種特異性，對于非人類細胞幾乎沒有活性。

· 成纖維細胞生長因子和神經營養因子是高度保守的，在其它的動物細胞中也能表現很好的活性。

4、蛋白形式

通常有兩種形式：含牛血清白蛋白BSA或不含BSA，不含BSA一般用“CF"表示。加入BSA可以提高蛋白質的穩定性，增加了貯存期限。含BSA的蛋白可以作為細胞組織培養物或者ELISA實驗中的理想標準品，而CF形式的蛋白尤其適用于活體實驗。以R&D systems的Human IL?4為例，就有兩種形式，買之前要先明確自己用來做什么實驗的。

5、查閱文獻

這個是快捷的方法，怎么去查文獻是我們必須要掌握的技能。

雖有萬般方法，但是只要你會查閱文獻，則萬事皆定。

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