鈣離子探針說明書

Fluo-3, AM
貨號：S21010
保存：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
產品說明：
CAS：121714-22-5
中文名：鈣熒光探針Fluo-3, AM
英文名：1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthe nyl)phenoxy]-2-(2- amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tet raacetic acid, pentaac etoxymethyl ester
結構式：
分子式：C51H50Cl2N2O23
分子量：1129.85
性質：
1. 外觀：紅色粉末
2. 純度：≥90% （HPLC）
3. 產品描述：
Fluo-3, AM是常用的檢測細胞內鈣離子濃度的熒光探針之一。它穿透細胞膜進入細胞后被細胞內的酯酶剪切形成Fluo-3 ，從而被滯留在細胞內，Fluo-3 若以游離配體形式存在時幾乎是非熒光性的，但是當它與細胞內鈣離子結合后可以產生較強的熒光，大激發波長為506nm ，大發射波長為526nm 。實際檢測時推薦使用的激發波長為488nm 左右，發射波長為 525～530nm 。可以使用激光共聚焦顯微鏡或流式細胞儀檢測細胞內鈣離子濃度的變化。
操作說明：（for Human T cells）
1，試劑
2 mM 的Fluo-3, AM/DMSO （將1mg Fluo-3, AM 溶于442μL DMSO ）
Pluronic F127
Hanks balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl， 1mM CaCl2， 0.5mM MgCl2，5mM Glucose，0.1% BSA，pH 7.4 ）
2，操作
（1） 向Fluo-3, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127 可以防止Fluo-3, AM 在HBSS 中
聚合并能幫助其進入細胞。
（2） 用HBSS 稀釋Fluo-3, AM 溶液，制備4μM 的Fluo-3, AM 工作液。
（3） 將Fluo-3, AM 工作液加入細胞，在37℃培養20分鐘。
（4） 加入5 倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS，再繼續培養40分鐘。
（5） 用HEPES buffer saline洗滌細胞 3 次，然后用HEPES buffer saline使細胞重懸浮，制成1×105 cells/mL 的溶液。
（6） 37 ℃下培養10分鐘，然后用該細胞進行熒光鈣離子檢測。激發波長506nm，發射波長526nm 。

注意：標記的條件因細胞種類而異，在每次實驗前，請先確定佳條件。以上方法僅供參考。