索萊寶新型植物基因組試劑盒操作步驟

索萊寶植物基因組試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統提取植物的基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司特別的新型材料，能夠高效、專一吸附 DNA，可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。下面介紹植物基因組試劑盒操作步驟。

操作步驟：

使用前先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1、植物組織預處理：取新鮮植物組織（不超過 100mg）或干重組織（不超過 20mg），于液氮中充分研磨至細粉狀，讓液氮自然揮發。

2、將研磨好的植物組織粉末迅速轉移到預先裝有 400ul 溶液 A、20ul RNase A（10mg/ml）和 5ul β-巰基乙醇的離心管中，充分顛倒混勻，室溫放置 10min。

3、加入 140ul 溶液 B，充分顛倒混勻，12000rpm 離心 10min，將上清轉移至新離心管(約 400-500ul)，注意不要吸入沉淀。

4、加入和上清相同體積的溶液 C，充分顛倒混勻，再加入和溶液 C 相同體積的無水乙醇，此時若出現絮狀物，將絮狀物吹散后一起加入吸附柱中，12000rpm 離心 5min，棄廢液，一次加不完可分兩次加入。

注意：如果吸附柱膜呈綠色或離心時有堵塞現象，可向吸附柱中加入 600ul 無水乙醇，并適當延長離心時間。

5、 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放回收集管。

6、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放回收集管中， 12000rpm 離心 2min。

7、將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘，否則殘余的乙醇可能會影響后續的實驗如酶切、PCR 等。

8、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置1-5min，12000rpm 離心 2min，即可得到高質量的植物基因組 DNA。

9、(可選)離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心 2min。

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