動(dòng)物基因組DNA提取方法及步驟介紹

基因組DNA提取是最常見分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)之一。今天給大家介紹的是動(dòng)物基因組DNA提取。DNA是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子，是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象，為了進(jìn)行測(cè)序、雜交、基因表達(dá)、文庫構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)，獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提，因此基因組DNA的提取也是分子生物學(xué)試驗(yàn)技術(shù)中最重要、最基本的操作之一。

動(dòng)物基因組DNA提取實(shí)驗(yàn)步驟：

1、取新鮮或冰凍動(dòng)物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細(xì)胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺(tái)式離心機(jī)以12000 rpm離心5min，取上清液入另一離心管中。

2、加2倍體積異丙醇，倒轉(zhuǎn)混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進(jìn)行PCR反應(yīng)等，需要進(jìn)一步純化的按下列步驟進(jìn)行）

3、加等量的酚：氯仿：異戊醇振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

4、取上層溶液至另一管，加入等體積的氯仿?異戊醇，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

5、取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L乙酸氨加入2倍體積的無水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ,10min。

6、小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。

7、用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。

8、小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。

9、加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

10、吸取適量樣品于GeneQuant上檢測(cè)濃度和純度。

在動(dòng)物基因組DNA提取試驗(yàn)中要特別注意以下幾點(diǎn)：

1、盡量簡(jiǎn)化操作步驟，縮短提取過程。

2、減少化學(xué)因素對(duì)核酸的降解。

3、減少物理因素對(duì)核酸的降解：機(jī)械剪切力和高溫。

4、防止核酸的生物降解：排除核酸酶。