關于CCK8實驗步驟的敘述

CCK-8為細胞增殖檢測試劑盒，細胞增殖是生物體的重要生命特征，細胞以分裂的方式進行增殖。必須強調指出，通過細胞分裂，可以將復制的遺傳物質，平均地分配到兩個子細胞中去。可見，細胞增殖是生物體生長、發育、繁殖和遺傳的基礎。CCK8實驗步驟如下。

CCK-8實驗步驟

1、在96孔板中配置100μl的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時（37℃，5% CO2）。 

2、向培養板加入10μl不同濃度的待測物質。

3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間（例如：6、12、24或48小時）。

4、向每孔加入10μl CCK8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。

5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

7、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μl 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發生變化。

 CCK-8實驗步驟原理：

1、Cell Counting Kit簡稱CCK試劑盒，是一種基于WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

2、WST-8屬于MTT的升級產品，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細胞數量。 

3、CCK法應用非常廣泛，如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。 

細胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。 Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8試劑盒，為MTT法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。