Caspase-3 活性檢測原理

Caspase-3是凋亡過程中最主要的終末剪切酶，因而也是研究最多的caspase，它激活pro-caspase-2,6,7,9等，特異水解多種凋亡關(guān)鍵蛋白如PARP，介導(dǎo)細胞核染色質(zhì)固縮、凋亡小體生成、核DNA斷裂。試劑盒測定原理基于Caspase-3特異水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide (Ac-DEVD-pNA)，釋放硝基苯胺pNA。游離硝基苯胺pNA呈黃色在405 nm具有最大吸收峰，用普通可見光分光光度比色方法測定。根據(jù)pNA標(biāo)準(zhǔn)管吸光度OD值和標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算來自底物肽釋放的pNA濃度，得到Caspase-3水解活性。反應(yīng)體系100微升，試劑盒提供的試劑，除標(biāo)準(zhǔn)曲線外可進行50或100次樣品測定。

適用：測定哺乳動物組織、細胞caspase-3活性。

組成與儲存：
1. 裂解緩沖液： 20 ml ，4 oC
2. 反應(yīng)緩沖液： 10 ml ，4 oC
3. 2 mM Ac-DEVD-pNA底物： 0.5 ml，－20 oC避光
4. 10 mM pNA標(biāo)準(zhǔn)品： 0.5 ml，－20 oC避光
以上標(biāo)出的量為100次檢測，50次檢測的試劑量減半。試劑常溫運輸。到達后按要求儲存，1年內(nèi)穩(wěn)定。

所需儀器：
酶標(biāo)儀與96孔酶標(biāo)板；或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。
工作波長：最大吸收波長405 nm，如不具備也可在400~450 nm范圍內(nèi)測定。