特殊細胞樣本的姬姆薩染色

更新時間：2023-06-02

點擊次數(shù)：1145

細胞涂片，通常需要固定和染色以便進行細胞鑒定和計數(shù)。更具體的可以分為血細胞系涂片和脫落細胞涂片兩大類。常用的染色方法有羅氏、巴氏和蘇木素-伊紅（HE）法三種。

羅氏染色液包含瑞氏、姬姆薩、瑞氏姬姆薩、迪夫染色液四種，在血細胞系涂片中廣泛應(yīng)用。巴氏染色液包含EA36、EA50、EA65三種，用于不同脫落細胞涂片的染色。HE法為使用比較廣泛的常規(guī)染色法。

上述產(chǎn)品在應(yīng)用到不同的細胞涂片時，各有所長，較為常用的是羅氏的姬姆薩染色。由于涂片樣本載體各有不同，染色的觀察重點也不同，因此相應(yīng)的涂片處理和染色步驟在實際應(yīng)用中都會基于標準步驟略有調(diào)整，以達到較為符合實驗需求的顯示效果。

標準步驟

新鮮全血或者抗凝血的染色步驟通常會作為血細胞系相關(guān)染色產(chǎn)品的標準步驟。通常為：

1、取5-10ul樣本，推片；

2、室溫晾干貼片；

3、使用甲醇或乙醇固定后染色亦或者直接使用含固定成分的染色液進行染色；

4、添加緩沖液稀釋染色液并輔助定色；

5、切片晾干后觀察。

調(diào)整方法

各種提取后重懸的細胞樣本大多需要對前三步的貼片固定步驟進行調(diào)整，這里提供幾種常用的調(diào)整方法：

針對成分復(fù)雜的淋巴細胞分離液提取樣本適當(dāng)離心后，使用1×PBS重懸細胞避免混懸液成分對細胞染色產(chǎn)生影響，如背景著色、成膜影響細胞觀察。

1×PBS、細胞灌洗液以及骨髓沖洗液等相比于全血而言都比較稀，難以涂布成穩(wěn)定形態(tài)，而且晾干產(chǎn)生的鹽析也會對細胞形態(tài)產(chǎn)生影響。因此大多使用加醇（5ul樣本加10ul乙醇或甲醇）輔助展片晾干或預(yù)固定（5ul樣本加5ul 10%中性福爾馬林固定液或4%多聚甲醛固定液，固定10-20min）后，畫圈涂片再晾干的形式來制備涂片。

需要同時保障胞核和胞質(zhì)的著色，在有核血細胞計數(shù)或腫瘤細胞計數(shù)過程中顏色對比并不夠清晰，可以通過對第四步稀釋液的種類進行更換的形式來強化對核著色和嗜多色紅細胞的顯示。如：使用1×PBS pH 7.2-7.4替代試劑盒內(nèi)稀釋液或自行購置的pH 6.4-6.8稀釋液進行染色后稀釋和定色可以洗脫胞質(zhì)嗜酸性著色，增強胞核的嗜堿性著色。但是，如需保留紅細胞著色就要嚴格控制稀釋液的使用。

通常細胞涂片建議直接晾干鏡檢，不建議長期保存。但如需短期保存1周-2個月亦可晾干后使用中性樹膠進行封片保存。

系列產(chǎn)品