ELISA試劑盒實驗中可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、大便)等均可作標本以測定其間某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清、尿液)，有些則需經預處理(如大便和某些分泌物)。血漿中除尚富含纖維蛋白原和抗凝劑外，別的成份均對等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只需待血清天然凝集、縮短后即可取得。
除特殊情況外，在醫學查驗中均以血清作為檢查標本。在ELISA中血漿和血清可對等運用。血清標本可按慣例方法收集，應留神防止溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標本或許會添加非特異性顯色。
ELISA試劑盒實驗中血清標本宜在新鮮時檢查
如有細菌污染，菌體中或許富含內源性HRP，也會發作假陽性反應。如在冰箱中保留過久，其間的可發作聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超過一星期測定的需低溫冰存。
凍住血清融解后，蛋白質有些濃縮，散布不均，應充分混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上劇烈振蕩。混濁或有堆積的血清標本應先離心或過濾，澄清后再檢查。
重復凍融會使抗體效價下跌，所以測抗體的血清標本如需保留作屢次檢查，宜少數分裝冰存。保留血清自收集時就應留神無菌操作，也可參與恰當防腐劑。
ELISA試劑盒實驗大多數檢查均以血清為標本。
